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發(fā)布日期:2024/7/18 8:40:00

 

    北京師范大學(xué)王友軍教授團(tuán)隊(duì)和南京大學(xué)董昊教授團(tuán)隊(duì)合作在《Biophysics Reports》發(fā)表題為“A bright cyan fluorescence calcium indicator for mitochondrial calcium with minimal interference from physiological pH fluctuations”文章,成功開(kāi)發(fā)出明亮的基因編碼青色熒光鈣離子指示劑,TurCaMP,該工具對(duì)生理狀態(tài)下線粒體基質(zhì)pH波動(dòng)不敏感,能夠更精確地監(jiān)測(cè)線粒體基質(zhì)中的鈣離子變化。王友軍教授的博士研究生谷文佳和董昊教授的博士研究生楊玉欽為該文章的共同第一作者。

鈣離子(Ca2+)是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使,參與調(diào)控包括神經(jīng)傳導(dǎo)、肌肉收縮在內(nèi)的多種生理過(guò)程。線粒體作為細(xì)胞內(nèi)Ca2+的主要儲(chǔ)存和調(diào)節(jié)場(chǎng)所,其內(nèi)部Ca2+的變化對(duì)于維持細(xì)胞功能正常發(fā)生至關(guān)重要。為了監(jiān)測(cè)線粒體基質(zhì)Ca2+活動(dòng)變化,已開(kāi)發(fā)出許多基因編碼的鈣指示劑(Genetically Encoded Ca2+ indicators, GECIs)用于線粒體鈣信號(hào)監(jiān)測(cè)。然而,由于現(xiàn)有的GECI信號(hào)易受線粒體基質(zhì)中pH波動(dòng)的影響,難以準(zhǔn)確檢測(cè)線粒體Ca2+信號(hào)。

為此,團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)出了基于青色熒光蛋白變體mTurquoise2的青色鈣指示劑TurCaMP(圖1A)。與GCaMP6m相比(圖1B),TurCaMP信號(hào)在pH 6-9的范圍內(nèi)幾乎不受pH影響(圖1C),因而具備對(duì)線粒體內(nèi)生理pH波動(dòng)不敏感性的優(yōu)點(diǎn)。TurCaMP的信號(hào)在鈣濃度增加時(shí)下降,這一反向鈣響應(yīng)特性使其具有高靜息熒光的特點(diǎn),有助于在低光照強(qiáng)度下實(shí)現(xiàn)高信噪比的胞內(nèi)Ca2+活動(dòng)監(jiān)測(cè),對(duì)于觀察細(xì)胞內(nèi)微小的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)如線粒體中的Ca2+動(dòng)態(tài)變化尤為重要。

A. 基于NEMO模式設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的TurCaMP模式圖。 B-C. HeLa細(xì)胞中,與mt-GCaMP6m信號(hào)相比(B),mt-TurCaMPb信號(hào)(C)對(duì)線粒體基質(zhì)的pH波動(dòng)不敏感。 D. 利用CCh誘導(dǎo)胞質(zhì)(NEMOm)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(R-CEPIAR1er)和線粒體(mt-TurCaMPb)中鈣活動(dòng)發(fā)生的多色鈣成像典型曲線。

研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)結(jié)合分子動(dòng)力學(xué)模擬分析和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)其熒光變化的分子機(jī)制可能與發(fā)色團(tuán)去質(zhì)子化程度相關(guān)。對(duì)于探究胞內(nèi)Ca2+參與調(diào)控的復(fù)雜多變的生理過(guò)程及病理機(jī)制,該青色GECI進(jìn)一步拓展了利用GECI進(jìn)行多色成像的范圍(圖1D),在神經(jīng)活動(dòng)和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)研究中具有重要的應(yīng)用前景。

關(guān)于Biophysics Reports學(xué)術(shù)期刊

Biophysics Reports是中國(guó)生物物理學(xué)會(huì)會(huì)刊,全英文雙月出版,現(xiàn)任主編為徐濤院士。作為一本國(guó)際化英文期刊,Biophysics Reports從創(chuàng)刊開(kāi)始即以全開(kāi)放獲?。∣A)模式出版,主要關(guān)注生命科學(xué)領(lǐng)域的新理論、新技術(shù)、新方法(New theory/New technology/New method),旨在為中國(guó)生命科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)方法研究提供一個(gè)國(guó)際化交流平臺(tái),促進(jìn)生命科學(xué)領(lǐng)域的學(xué)術(shù)交流和研究合作。學(xué)科范圍覆蓋全部生命科學(xué)領(lǐng)域,欄目包括Review / Research article / Method / Protocol / Opinion,其中Review / Research article為綜述及科研進(jìn)展;Method鼓勵(lì)發(fā)表技術(shù)方法學(xué)研究;Protocol發(fā)表經(jīng)典方法或重要研究中細(xì)化的實(shí)驗(yàn)流程。

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